Pro mikroskopování rostlinných objektů můžeme použít dočasné nebo trvalé preparáty. Ve cvičení pozorujeme dočasné preparáty, které si připravíme následujícím způsobem. Do středu očištěného podložního sklíčka naneseme kapátkem nebo pipetou kapku vody a do ní vložíme připravený preparát.
Preparáty se nejčastěji připravují příčným řezem žiletkou. Objekt ve vodě překryjeme krycím sklíčkem tak, že je nejdříve šikmo postavíme na hranu, posuneme ke kapce, která přilne k okraji sklíčka, zachytíme okraj špičkou preparační jehly a pak sklíčko zvolna spouštíme na kapku vody. Tento postup je nutno dodržovat proto, aby se v preparátu nevytvořily vzduchové bubliny, které ruší pozorování. Pak podle potřeby odsajeme přebytečnou vodu filtračním papírem nebo naopak přidáme malou kapku vody ke hraně krycího sklíčka, která se pod ně vsaje.
Základní postavení mikroskopu je okulárovým tubusem k sobě, nastavený objektiv nejmenšího zvětšení, otevřená clona kondenzoru a zapnutá mikrolampa. U binokulárních mikroskopů je nutné si upravit rozteč obou okulárů podle vzdálenosti svých očí, aby splynul obraz preparátu. Sklíčka s preparátem připevníme na pracovní stolek a objekt umístíme do středu nad čočku kondenzoru. Pak přiblížíme šroubem kondenzoru stolek s preparátem do bezprostřední blízkosti objektivu, přičemž jejich vzdálenost kontrolujeme pohledem ze strany.
Nyní je možné dívat se do okuláru a hrubým posunem vzdálenost objektivu od preparátu zvyšovat (otáčením makrošroubu směrem k sobě) až se preparát objeví v zorném poli. Nepodaří-li se obraz preparátu najít, je třeba postup znovu opakovat. Teprve potom preparát jemně doostříme posouváním mikrometrického šroubu a při současné manipulaci s clonou regulujeme intenzitu osvětlení. Při barvení preparátu vitálními barvivy použité činidlo kápneme k okraji položeného krycího sklíčka a z druhé strany odsáváme vodu. Projasňování preparátu se provádí při sledování obsahu silnějších nebo lignifikovaných objektů.
Pomocí projasňovacího média se upraví index lomu buněčných komponent a okolního média. Buněčný obsah zůstává zachován a je možné pozorovat, při různém zaostření, strukturu objektu v tzv. optických řezech. V medicíně se používají podobné principy pro pozorování a kreslení biologických objektů, včetně barevných barviv a roztlakových preparátů.
Mezi základní pomůcky v laboratoři patří pinzeta, skalpel, preparační jehla, Petriho misky, kádinky a zkumavky. Optický (světelný) mikroskop využívá průchodu viditelného světla preparátem. Mikroskopy často mívají více objektivů, které poskytují různou míru zvětšení; celkové zvětšení se počítá jako násobek zvětšení objektivu a okuláru. K zaostřování slouží zaostřovací šroub; mikroskop může mít i makro- a mikrošroub pro jemné doostření. Do výuky se běžně zařazují trvalé a dočasné preparáty, kde dočasné preparáty slouží pro jednorázové prohlédnutí.
Pro pozorování mohou být použity i stereomikroskopy (binokulární lupy), které poskytují trojrozměrný obraz a usnadňují manipulaci s většími vzorky; nasvětlení bývá shora a obraz není stranově převrácený, což zjednodušuje práci s přírodninami.
Různé typy preparátů a jejich použití
Dočasné preparáty se často vytvářejí z dužniny rostliny a minimalizují vzduchové bubliny; některé přírodniny je výhodné pozorovat suché a bez vody. Při pozorování buněk v dužnině šípku stačí velmi malé množství dužniny na špičce preparační jehly. Pro větší objekty lze zhotovovat řezy a oddělovat menší části vzorku. Mikroskopování umožňuje sledovat struktury, které nejsou viditelné pouhým okem, a tím si uvědomit stavbu rostlinných orgánů a buněk.
V rámci výuky se často používají dočasné preparáty a doplňkové nástroje, jako je stereomikroskop, které rozšiřují možnosti pozorování a pomáhají studentům pochopit trojrozměrnou strukturu vzorků.
Tabulka: Přehled základních pomůcek a typů preparátů
| Název | Popis | Použití |
|---|---|---|
| Podložní sklo | Base pro vzorek | Vytvoření dočasného preparátu |
| Krytí sklíčko | Uzavření preparátu | Ochrana obsahu a zlepšení optiky |
| Kapka vody | Rozpouštění a lepší rozložení vzorku | Dočasné preparáty |
| Připravovací jehla | Manipulace s preparátem | Překrývání a rozebrání vzorku |
| Pinzeta | Chycení vzorků | Manipulace s drobnými částmi |
| Skalpel | Řezání vzorku | Příčný řez rostného materiálu |
| Buniné barviva | S barvivy pro lepší kontrast | Barvení preparátů |
| Mikroskop s kondenzorem | Ovládání světelného toku | Intenzita osvětlení a ostření |
V průběhu cvičení je důležité dodržovat bezpečnostní zásady v biologické laboratoři, včetně správného použití nástrojů a manipulace s chemikáliemi a barvivy. Skladování a manipulace s preparáty mohou zahrnovat trvalé i dočasné preparáty, přičemž dočasné preparáty jsou určeny pro krátkodobé pozorování a trvalé preparáty pro dlouhodobé uchování.
tags: #vsechny #nastroje #nazvy #k #mikroskopovani